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　　PCR，qPCR，dPCR分別是什么?有什么區(qū)別?

　　PCR，qPCR，dPCR分別是什么嗎?這些東西，在生物行業(yè)里見的比較多，我們生物行業(yè)的從業(yè)人員懂得應(yīng)該多一些。PCR技術(shù)，在二十世紀(jì)八十年代被發(fā)明。現(xiàn)在DNA擴(kuò)增已成為生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。96孔板供應(yīng)天津本生告訴大家，在過去的三十年中，這項(xiàng)經(jīng)典技術(shù)已得到不斷改進(jìn)，以解決研究中的新問題和新需求。從經(jīng)典PCR，實(shí)時(shí)定量PCR到當(dāng)前的數(shù)字PCR，PCR技術(shù)在不斷變化，但從未消失。如今，PCR技術(shù)已經(jīng)從實(shí)驗(yàn)室中分離出來，在遺傳鑒定和疾病診斷中發(fā)揮了巨大作用，并且在日益廣闊的領(lǐng)域中具有新的生命力。

　　PCR方法:

　　PCR的原理在這里不需要進(jìn)一步解釋。多年來，研究人員基于此開發(fā)了一系列衍生技術(shù)。當(dāng)前的PCR方法可分為三類：終點(diǎn)PCR，qPCR和dPCR。

　　終點(diǎn)PCR:

　　端點(diǎn)PCR是原始，簡單的PCR方法，并且今天仍然被廣泛使用。 PCR反應(yīng)完成后，用戶只能通過凝膠電泳，毛細(xì)管電泳等方法檢測產(chǎn)物。終點(diǎn)PCR本身無法量化，因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)生的DNA數(shù)量可能無法反映初始情況。例如，不同樣品和序列之間的擴(kuò)增效率存在差異。

　　qPCR和dPCR:

　　研究人員已經(jīng)通過兩種方式克服了定量PCR分析的挑戰(zhàn)：實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)和數(shù)字PCR(dPCR)。 qPCR主要使用插入染料或熒光探針(例如TaqMan)。通過監(jiān)測PCR期間的熒光強(qiáng)度，可以比較多個(gè)樣品的DNA水平。數(shù)字PCR(dPCR)的基本工作原理很簡單。先將樣品分為多個(gè)PCR反應(yīng)，每個(gè)反應(yīng)多包含一個(gè)模板。然后通過對(duì)陽性和陰性反應(yīng)進(jìn)行計(jì)數(shù)來確定初始樣品中模板分子的數(shù)量。

　　盡管qPCR和dPCR都能夠定量樣品中的核酸，但它們有一個(gè)重要的區(qū)別。 qPCR只能實(shí)現(xiàn)相對(duì)定量(例如，樣品A的目標(biāo)序列是樣品B的目標(biāo)序列的兩倍)，除非使用此標(biāo)準(zhǔn)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)字PCR本身是絕對(duì)定量的，不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。另一方面，qPCR技術(shù)更加成熟，市場上有大量商業(yè)產(chǎn)品可供選擇。 dPCR仍然是小的新鮮肉。它不如qPCR廣泛使用且價(jià)格昂貴。與dPCR相比，qPCR更適合于高通量分析，并且動(dòng)態(tài)范圍廣。

　　DPCR通常更準(zhǔn)確。 qPCR可以輕松區(qū)分兩倍的濃度差異(例如5個(gè)拷貝和10個(gè)拷貝)，但是面對(duì)小的差異，它卻較弱。 dPCR理論上可以識(shí)別相差少于20%的拷貝數(shù)，例如5和6拷貝。該準(zhǔn)確度對(duì)于量化涉及染色體重排的基因的拷貝數(shù)或量化癌癥患者血液中的循環(huán)生物學(xué)指標(biāo)特別有用。由于dPCR相當(dāng)于在反應(yīng)結(jié)束時(shí)稀釋樣品并讀取數(shù)據(jù)，因此dPCR比qPCR對(duì)抑制劑的抵抗力更高。

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