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人白介素6(IL-6)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
BS-0049 人白介素6(IL-6)ELISA檢測(cè)試劑盒
1. 目的?
本試劑盒用于定量檢測(cè)人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及組織勻漿樣本中白介素6(IL-6)的濃度。本檢測(cè)為科研提供數(shù)據(jù)，供參考。
2. 實(shí)驗(yàn)原理?
采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)：
捕獲抗體?：抗人IL-6單抗預(yù)包被于微孔板，形成固相抗體層。
抗原結(jié)合?：樣本中IL-6與捕獲抗體結(jié)合，再加入生物素化檢測(cè)抗體，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色反應(yīng)?：加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素，催化底物TMB顯色(藍(lán)色→黃色)，顏色深淺與IL-6濃度正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)。
3. 試劑盒組成?
酶標(biāo)板?：96孔/48孔預(yù)包被抗IL-6抗體。
標(biāo)準(zhǔn)品?：6個(gè)梯度濃度(0、3、6、12、24、48 pg/mL)，凍干粉保存。
檢測(cè)抗體?：生物素化抗IL-6抗體，2-8℃避光保存。
酶結(jié)合物?：HRP標(biāo)記鏈霉親和素，避光保存。
底物液?：TMB顯色液，避光保存。
終止液?：2M硫酸，終止顯色反應(yīng)。
洗滌液?：20×濃縮液，需稀釋使用。
樣本稀釋液?：10×濃縮液，用于樣本預(yù)處理。
封板膜?：密封酶標(biāo)板，防止蒸發(fā)。
說(shuō)明書(shū)?：詳細(xì)操作流程及注意事項(xiàng)。
4. 樣本處理?
血清/血漿?：室溫凝固10-20分鐘，離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)收集上清，避免溶血。
細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片，檢測(cè)分泌性IL-6。
組織勻漿?：PBS稀釋至細(xì)胞濃度約100萬(wàn)/mL，反復(fù)凍融釋放細(xì)胞內(nèi)成分，離心取上清。
保存?：2-8℃短期(≤48小時(shí))或-20℃/-70℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。
禁忌?：避免含NaN3樣本，因NaN3抑制HRP活性。
5. 操作步驟?
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：凍干標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水復(fù)溶，梯度稀釋至0-48 pg/mL。
加樣?：
標(biāo)準(zhǔn)品孔：各加50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品。
樣本孔：加40μL樣本稀釋液+10μL樣本(5倍稀釋)。
空白孔：不加樣本及酶標(biāo)試劑。
溫育?：37℃孵育60分鐘，封板膜密封。
洗滌?：甩干孔內(nèi)液體，用洗滌液浸泡10-30秒，重復(fù)3-5次。
加酶標(biāo)試劑?：每孔加100μL HRP標(biāo)記抗體，37℃孵育30分鐘。
顯色?：加100μL TMB底物，避光顯色15分鐘。
終止?：加100μL終止液，藍(lán)色變黃色，30分鐘內(nèi)測(cè)OD值。
6. 結(jié)果計(jì)算?
標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制曲線。
樣本濃度?：根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得IL-6含量，乘以稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng)?：
預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本稀釋倍數(shù)，確保OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。
避免氣泡產(chǎn)生，輕柔混勻標(biāo)準(zhǔn)品。
顯色底物避光保存，終止液順序與顯色一致。
7. 性能指標(biāo)?
靈敏度?：低檢測(cè)濃度<0.1 pg/mL。
特異性?：僅識(shí)別人IL-6，不與其他細(xì)胞因子交叉反應(yīng)。
重復(fù)性?：板內(nèi)、板間變異系數(shù)<10%。
8. 注意事項(xiàng)?
試劑保存?：2-8℃避光，有效期6個(gè)月，勿使用過(guò)期試劑。
操作規(guī)范?：
避免接觸微孔板內(nèi)壁，防止污染。
洗板時(shí)充分浸泡，提高洗滌效果。
顯色反應(yīng)避光，終止液充分混勻。
樣本限制?：不可檢測(cè)NaN3樣本。
9. 儲(chǔ)存條件?
未開(kāi)封試劑盒：2-8℃保存。
開(kāi)封后：按組分說(shuō)明分裝保存，避免反復(fù)凍融。
注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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