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人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
BS-0203-A 人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA 試劑盒 96T
BS-0203-B 人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA 試劑盒 48T
一、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清中的GLP-1水平。其核心步驟包括：
固相抗體包被?：微孔板預(yù)包純化抗GLP-1單克隆抗體。
抗原-抗體結(jié)合?：樣本中GLP-1與固相抗體結(jié)合，再加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物。
顯色反應(yīng)?：加入底物TMB顯色，酸終止后于450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，濃度與顯色深度成正比?。
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格 備注
預(yù)包被微孔板 12孔×8條 含抗GLP-1抗體
標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml/瓶 凍干粉，需復(fù)溶
HRP標(biāo)記二抗 6ml 避光保存
顯色底物(TMB) A液6ml+B液6ml 現(xiàn)用現(xiàn)配
終止液 6ml 2M硫酸
濃縮洗滌液 20ml 需1:20稀釋
樣本xishi液 6ml 含穩(wěn)定劑
注?：不同品牌組分可能存在差異，詳見(jiàn)具體說(shuō)明書(shū)。
三、樣本處理
1. 樣本類(lèi)型
血清/血漿?：EDTA或肝素抗凝，離心取上清。
細(xì)胞上清?：1000×g離心20分鐘去除雜質(zhì)。
組織勻漿?：裂解后離心取上清。
2. 保存條件
短期?：2-8℃保存≤48小時(shí)。
長(zhǎng)期?：分裝后-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。
3. 稀釋建議
常規(guī)樣本?：推薦稀釋5-20倍(如取20μL樣本+180μL稀釋液)。
高濃度樣本?：需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù)，最高稀釋100000倍(三步稀釋法)。
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品配制?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加1mL稀釋液復(fù)溶，混勻后靜置10分鐘。
進(jìn)行系列稀釋(如8pmol/L→4pmol/L→…→0.5pmol/L)。
加樣?
標(biāo)準(zhǔn)孔：50μL/孔。
樣本孔：先加40μL稀釋液，再加10μL樣本(總稀釋5倍)。
空白孔：不加樣本及二抗。
孵育?
37℃孵育120分鐘，洗板3次(每次浸泡1分鐘)。
顯色與終止?
每孔加TMB顯色液100μL，37℃避光孵育15分鐘。
加終止液50μL終止反應(yīng)，30分鐘內(nèi)測(cè)OD值。
五、注意事項(xiàng)
樣本避免?：溶血、高脂樣本及含NaN3的樣本(抑制HRP活性)。
試劑平衡?：使用前室溫平衡20分鐘，濃縮洗滌液需40℃水浴溶解結(jié)晶。
質(zhì)量控制?：建議設(shè)置復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.95。
六、結(jié)果分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以O(shè)D值對(duì)濃度繪制四參數(shù)方程。
濃度計(jì)算?：樣本OD值代入曲線方程，再乘以稀釋倍數(shù)。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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